高效液相色谱仪梯度洗脱时，常用一个弱极性溶剂A和一个强极性溶剂B组合，以梯度洗脱时间为横坐标，以流动相中强极性组分B的体积百分含量为纵坐标，可绘出梯度洗脱曲线。若在单位时间内，强极性溶剂B在流动相中的体积百分含量以恒定速率增加，则流动相的极性呈线性梯度输出；若不以恒定速度增加，则流动相的极性呈凸形或凹形梯度输出。

当梯度洗脱方式确定后，对应不同的梯度洗脱形状获得色谱图。

1、若呈线性梯度洗脱，色谱图中每个谱带宽度相等，各个谱带间具有相同的分离度。

2、若呈指数凸形梯度洗脱，在分离开始时，B的体积百分含量增加迅速，使各组分谱带以较低的平均容量因子k值洗脱，最终谱带的k值也较低，使开始被洗脱的色谱峰形尖锐，分离度减小。在分离的后期，B的体积百分含量增长减慢，使后被洗脱的色谱峰谱带加宽，分离度增大。

3、若呈指数凹形梯度洗脱，开始被洗脱的色谱峰谱带较宽，分离度较好；后洗脱的色谱峰谱带较尖锐，分离度减小。

   

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