高效液相色谱仪化学键合固定相的重复性、改性完全程度可通过残余羟基、覆盖度和覆盖均匀性表示，测定和评价的方法有微量元素分析法、色谱法和光谱法等。

一、微量元素分析法：

直接测定键合相的碳含量。

1、表面键合官能团浓度：

C% =（键合相中C的重量/载体的重量）×100%

（1）商品键合相：2%～29%

（2）甲基硅烷键合相：3%～4%

（3）十八烷基硅烷键合相：20%

由于C%随基质比表面积和键合有机基团的分子量的变化而变化，在研究工作中常采用表面键合相浓度α表示，即单位表面积所含键合相的浓度（umol/m²）。

α= W/（M×S）

式中：W为1g载体上键合有机官能团的质量（ug），M为键合有机官能团的摩尔质量（g/mol），S为载体比表面积（m²/g）。

2、表面碳覆盖率：

即硅胶表面含碳的质量百分数。

C% =（12×N_C×W/M×10⁶）×100%

式中：12为碳的原子量，N_C为键合有机官能团的碳数，W和M含义同上。

3、有机官能团的表面覆盖度：

即在单位表面积上已键合的有机官能团的量（umol）与可反应的硅醇基的量（umol）之比。

二、色谱法：

用非极性键合相填料正相洗脱的方法检查残余羟基的含量，即用庚烷作流动相。若残余羟基很少，则象甲醇和丙酮等极性化合物的保留时间与t_M相近，且峰形对称。若残余羟基很多，则情况相反。这种评价方法较为客观。

三、光谱法：

基于Si－OH基在3750cmˉ¹处有特征的红外吸收谱带，获得某些信息。

   

来源：http://www.fudizao.com