采用化学键合固定相的高效液相色谱仪称为化学键合固定相色谱仪（简称键合相色谱仪），分反相键合相色谱仪、正相键合相色谱仪和离子键合相色谱仪。化学键合固定相的研制成功和应用是高效液相色谱仪发展的一个里程碑，在高效液相色谱仪中占有很重要的地位。

一、类型：

1、反相键合相色谱仪：

（1）固定相：

采用极性较小的键合固定相，如硅胶－C₁₈H₃₇和硅胶－苯基等。

（2）流动相：

1）采用极性较强的溶剂，如甲醇、乙腈－水、水和无机盐的缓冲溶液等为流动相，多用于分离多环芳烃等低极性化合物。2）采用含一定比例的甲醇或乙腈的水溶液为流动相，用于分离极性化合物。

3）采用水和无机盐的缓冲液为流动相，用于分离易离解的化合物，如有机酸、有机碱和酚类等。

（3）分离机理：

把非极性的烷基键合相看作一层键合在硅胶表面上的十八烷基的“分子毛”，这种“分子毛”有较强疏水特性。

2、正相键合相色谱仪：

（1）固定相：

将极性的有机基团键合在硅胶表面。

（2）流动相：

以非极性或极性小的溶剂（如烃类）中加入适量的极性溶剂（如氯仿、醇和乙腈等）为流动相。

分配比k随着组分极性的增加而增大，随着流动相极性增加而降低。

用于分离极性化合物，特别适合异构体和极性不同的化合物的分离。

3、离子键合相色谱仪：

（1）固定相：

以表面多孔型和全多孔微粒型硅胶为基质，化学键合各种离子交换基团，如－SO₃H、－CH₂NH₂、－COOH和－CH₂N（CH₃）等。

（2）流动相：

一般采用缓冲溶液。

（3）分离机理：

与离子交换色谱仪类同。

二、特点：

1、优点：

（1）通过改变流动相的组成和种类，可有效地分离各种类型的化合物（非极性、极性和离子型）。

（2）键合固定相非常稳定，在使用中不易流失，适用于梯度洗脱，特别适合分离容量因子k值范围宽的样品。

2、缺点：

不能用于酸、碱度过大或存在氧化剂的缓冲溶液作流动相的体系。

   

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