色谱仪分析方法包括定性和定量分析方法。
第一节 色谱仪定性分析方法
本节主要阐述气相色谱仪定性分析方法。
气相色谱仪定性分析就是要确定各色谱峰所代表的化合物。由于各种物质在一定色谱条件下均有确定的保留值，保留值可作为一种定性指标，目前各种色谱定性方法都是基于保留值定性的。但不同物质在同一色谱条件下，可能具有相似或相同的保留值，即保留值并非专属，因此仅根据保留值对一个完全未知的样品定性是困难的。如果在了解样品来源、性质和分析目的的基础上，对样品组成作初步判断，再结合下列方法，可确定色谱峰所代表的化合物。
一、利用已知纯物质对照定性：
利用已知纯物质对照定性是基于在一定操作条件下各组分的保留时间为定值，是色谱定性分析中最方便的方法。
纯物质对照定性仅适用于组分性质已有所了解、组成比较简单、有纯物质的未知物。
二、利用已知物峰增高定性：
当未知样品中组分较多，色谱峰过密，不易辨认时，或仅作未知样品指定项目分析时，可用此法。
首先作出未知样品的色谱图，然后在未知样品中加入某已知物，又得到一个色谱图，峰高增加的组分可能为这种已知物。
三、根据相对保留值定性：
利用保留值定性时，必须使两次分析条件完全一致，有时不易做到。有时利用相对保留值定性比利用保留值定性更方便、更可靠，只要保持柱温不变即可。利用相对保留值定性要求找一个基准物质，通常选容易得到纯品而且与被分析组分相近的物质作基准物质，如正丁烷、环己烷、正戊烷、苯、对二甲苯、环己醇和环己酮等。
四、根据保留指数定性：
保留指数表示样品在GC固定相上的保留行为，是目前使用最广泛并被国际公认的GC定性指标。
1、理论基础：
正构烷烃的调整保留时间的对数（lgtr′）与其相应的碳数成线性关系。
2、计算方法：
保留指数是以正构烷烃作为标准，规定在任何色谱条件下正构烷烃的保留指数均为其分子中的碳数乘以100。待测样品的保留指数IX是与待测样品具有相同调整保留值的假想的正构烷烃中的碳数乘以100。测定时，将碳数为n和n+1的正构烷烃加到待测样品中进行色谱分析，待测样品的保留指数IX可按下式计算：
IX = [n +（lgtr（X）′－lgtr（n）′）/（lgtr（n+1）′－lgtr（n）′）]×100
式中：tr（n+1）′＞tr（X）′＞tr（n）′
五、利用经验规律和文献值定性：
当没有待测组分的纯标准样品时，可利用GC经验规律和文献值进行定性。
1、碳数规律：
大量实验证明，在一定温度下，同系物的调整保留时间的对数与分子中的碳原子数成线性关系，即：
lgtR′= A1n + C1
式中：A1和C1均为常数，n为分子中的碳原子数（n≥3）。
根据某一同系物中两个或更多已知组分的调整保留时间的对数值，可求得同系物中其它组分的调整保留时间。
2、沸点规律：
同族中具有相同碳数碳链的异构体化合物，其调整保留时间的对数和它们的沸点成线性关系，即：
lgtR′= A2Tb + C2
式中：A2和C2均为常数，Tb为组分的沸点（K）。
根据同族同碳数碳链异构体中两个或更多已知组分的调整保留时间的对数值，可求得同族中具有相同碳数的其它异构体的调整保留时间。
六、利用多柱定性：
对于复杂样品，利用多柱定性更有效、更可靠，使原来在一根色谱柱上可能出现相同保留值的两种组分，在另一根色谱柱上可能出现不同的保留值。
实验表明，同系物在两种不同固定相上保留值的对数成线性关系。
七、利用多检测器定性：
在相同的色谱条件下，同一样品在不同的检测器上有不同的响应信号，可利用检测器的选择性进行定性。
实际工作中多采用双检测器定性。双检测器可串联，也可并联。
八、利用化学反应定性：
1、利用衍生物定性：
有机物中某些难挥发、热不稳定或极性很强的物质，如酸类、糖类、醇类和胺类等，可利用各种衍生反应生成衍生物后进行定性。这样可克服直接分析的困难，使这些物质的分析变得比较容易。
对于GC可直接定性的未知物，如已初步定性，也可将未知物和标准物同时转化成衍生物，如果未知物与标准物的保留值变化一致，则可认为它们是同一物质。
2、利用消除法定性：
利用某些官能团与化学试剂反应，使样品中某组分消失而不出峰，以确定所消失的组分代表何种物质。
消失反应可以在柱上、注射器中或单独的微型反应管中进行，然后将反应物注入GC进行分析定性。
3、利用柱后流出物的化学检验定性：
收集色谱柱分离后的纯组分，利用官能团分类试剂进行检验定性。
收集方法有溶剂共冷凝收集法、溶剂结晶收集法和螺旋玻璃管冷凝收集法等。
也可将柱后馏出物直接通入盛有官能团分类试剂的检验管，利用官能团特征反应对各种馏出物进行定性。
九、利用GC与其它仪器联用定性：
GC具有很强的分离能力，适合多组分混合物的定量分析，但定性分析常因没有纯物质或几种物质的保留值相近而发生困难，因此，对复杂混合物的定性分析难以做出正确判断。而质谱、红外光谱和核磁共振谱等特别适合单一组分的定性，将GC与其联用，能发挥各自的长处，可解决复杂混合物的定性问题。
联用方式有不在线和在线两种。不在线是将色谱柱分离的组分收集后，再进入其它仪器进行定性。在线是色谱柱分后的组分直接进入其它仪器进行定性。后一种发展十分迅速，目前已发展了各种形式的联用仪器，其中以色质联用最有效，是鉴别复杂混合物强有力的工具之一。
第二节 色谱仪定量校正因子
色谱仪定量分析的依据是样品中各组分的量与其峰面积成正比，但峰面积的大小与组分的质量和性质有关，当两个质量相同的不同组分在相同条件下使用同一检测器进行测定时，所得的峰面积不相同。因此，样品中某一组分的百分含量并不等于该组分的峰面积在各组分峰面积总和中所占的百分率。这样就不能直接利用峰面积计算样品各组分的含量。为了使峰面积能真实反映物质的质量，需要对峰面积进行校正，为此在定量计算时引入校正因子。
一、绝对校正因子fi：
某组分i的绝对校正因子fi是组分i的质量mi与组分i的峰面积Ai之比。即：
fi = mi/Ai
由于精确测量进样质量困难，峰面积与色谱条件有关，要保持测定fi值时的色谱条件相同，既不可能又不方便，要精确求出fi值是比较困难的。即使能够得到准确的fi值，由于没有统一标准而无法直接应用。为此提出相对校正因子的概念来解决色谱定量分析中的计算问题。
二、相对校正因子fi′：
1、定义：
某组分i的相对校正因子fi′是组分i的绝对校正因子fi与标准物质s的绝对校正因子fs之比。即：
fi′= fi/fs
推导：fi′=（mi/Ai）/（ms/As）=（mi/ms）×（As/Ai）
fi′×Ai =（mi/ms）×As
可见，当组分i的质量mi与标准物质s的质量ms相等时，fi′×Ai的数值与质量为ms的标准物质的峰面积As相等。通过相对校正因子，可以把各个组分的峰面积分别换算成与其质量相等的标准物质的峰面积，这样比较标准就统一了。这是归一化法计算各组分百分含量的基础。
2、表示方法：
通常所指的校正因子是相对校正因子。
（1）相对质量校正因子fm′：
上面介绍的相对校正因子中的组分和标准物质都是以质量表示的，故又称为相对质量校正因子。
fm′= fi，m/fs，m =（Asmi）/（Aims）
式中：As为标准物质的峰面积。
fi，m为组分i的绝对质量校正因子。
fi，s为标准物质的绝对质量校正因子。
ms为标准物质的质量。
（2）相对摩尔校正因子fM′：
fM′= fi，M/fs，M =（AsmiMs）/（AimsMi）= fm′×（Ms/Mi）
式中：fi，M为组分i的绝对摩尔校正因子。
fs，M为标准物质的绝对摩尔校正因子。
Mi为组分i的相对分子质量。
Ms为标准物质的相对分子质量。
（3）相对质量响应值Sm：
Sm= 1/fm′
（4）相对摩尔响应值SM：
SM= 1/fM′
3、测定：
相对校正因子仅与被测物、标准物质和检测器类型有关，与操作条件无关，因此，fi′值可以从文献中查出引用。若文献中查不到所需的fi′值，可以进行测定。热导池检测器多以苯为标准物质，氢火焰离子化检验器多以正庚烷为标准物质，测定时最好用色谱纯试剂。
三、热导池检测器相对校正因子的估算：
热导池检测器采用氢气和氦气作载气时，相对校正因子值基本可以通用，用氮气作载气时不能通用。在既无纯组分进行测定，又查不到文献数据时，可利用一些规律估算相对校正因子值。
1、分子量规律法：
同系物组分的相对摩尔响应值SM与其相对分子质量之间有线性关系，估算公式为：
SM = A1Mi + B1
式中：Mi为组分i的相对分子质量。
A1和B1均为同系物的特征常数。
同系物的特征常数A1和B1值：
（1）直链烷烃：
1）组分：C3～C10
2）斜率A1：1.35
3）截距B1：6.7
（2）甲基烷烃：
1）组分：C4～C7
2）斜率A1：1.25
3）截距B1：10.8
（3）二甲基烷烃：
1）组分：C5～C7
2）斜率A1：1.2
3）截距B1：13
（4）甲基苯类：
1）组分：C7～C9
2）斜率A1：1.16
3）截距B1：9.7
（5）α－烯烃：
1）组分：C2～C4
2）斜率A1：1.2
3）截距B1：13
（6）直链酮类：
1）组分：C3～C8
2）斜率A1：0.86
3）截距B1：35.9
（7）伯醇：
1）组分：C2～C7
2）斜率A1：0.81
3）截距B1：34.9
（8）仲醇：
1）组分：C3～C5
2）斜率A1：0.86
3）截距B1：33.6
（9）叔醇：
1）组分：C4～C5
2）斜率A1：0.81
3）截距B1：34.8
（10）直链脂：
1）组分：C2～C7
2）斜率A1：0.84
3）截距B1：37.1
（11）直链醚类：
1）组分：C4～C10
2）斜率A1：0.89
3）截距B1：43.3
2、碳数规律法：
以同系物的相对质量响应值Sm对分子中的碳原子数作图，得到一条渐近线关系曲线。曲线在较高碳原子数时呈水平趋势，意味着Sm值趋于相同，即分析分子量相差不大或分子量较大的一些同系物样品时，可直接用它们各自的面积进行定量计算。当分析碳数范围较宽的样品时，较低碳数的同系物（如C1～C3）的Sm值与较高碳数同系物的Sm值相差较大，定量计算时必须采用相对校正因子进行校正。
3、基团截面积法：
一般情况下，醇、醛、酮、醚、酯和卤素等极性化合物的相对摩尔响应值等于构成该化合物各个基团的相对摩尔响应值之和。用此法估算的数值与一般实验值吻合良好，误差约3%。
部分基团的相对摩尔响应值Sm：
（1）CH3－：12
（2）－CH2－：11
（3）－CH：10
（4）－C－：9
（5）F：57
（6）I：83
（7）－H：1
（8）－O－：62
（9）－C = O：64
（10）C = O－O：77
（11）Cl：67
（12）－C－OH：60
（13）－CH－OH：61
（14）－CH2－OH：62
（15）－C6H5：99
（16）B：74
四、氢火焰离子化检验器相对校正因子的估算：
氢火焰离子化检测器的载气种类对相对校正因子值影响不大，但不同类型化合物的相对校正因子值受检测器结构、载气流速、燃气流速和操作压力的影响较大。在既无纯组分进行测定，又查不到文献数据时，可利用一些规律估算相对校正因子值。
1、碳数规律法：
同系物组分的相对摩尔响应值SM与其相对分子质量之间有线性关系，估算公式为：
SM = A2ni + B2
式中：ni为组分i的碳原子数。
A2和B2为同系物的特征常数。
同系物物的特征常数A2和B2值：
（1）直链烷烃：
1）组分：C1～C10
2）斜率A2：14.3
3）截距B2：0
（2）直链烯烃：
1）组分：C2～C10
2）斜率A2：14
3）截距B2：0
（3）环烷烃：
1）组分：C3～C9
2）斜率A2：14
3）截距B2：0
（4）支链烷烃：
1）组分：C5～C10
2）斜率A2：12.7
3）截距B2：12.7
（5）直链芳烃：
1）组分：C6～C12
2）斜率A2：11.45
3）截距B2：18.4
（6）甲基取代芳烃：
1）组分：C7～C12
2）斜率A2：10.3
3）截距B2：26.8
（7）伯醇：
1）组分：C1～C10
2）斜率A2：13.8
3）截距B2：－6.07
（8）仲醇：
1）组分：C3～C6
2）斜率A2：14
3）截距B2：－10.2
（9）叔醇：
1）组分：C4～C6
2）斜率A2：13.8
3）截距B2：－0.96
（10）多元醇：
1）组分：C2～C6
2）斜率A2：4.95
3）截距B2：5.95
（11）醛类：
1）组分：C1～C10
2）斜率A2：13.4
3）截距B2：－9.4
（12）直链酮类：
1）组分：C3～C9
2）斜率A2：14.3
3）截距B2：－13.9
（13）支链酮类：
1）组分：C5～C9
2）斜率A2：10.7
3）截距B2：6.42
（14）脂肪酸：
1）组分：C1～C8
2）斜率A2：14.3
3）截距B2：－13.3
（15）脂肪酸甲酯：
1）组分：C1～C5
2）斜率A2：14.8
3）截距B2：－22.9
（16）甲酸酯：
1）组分：C1～C5
2）斜率A2：13.8
3）截距B2：－15.2
（17）乙酸酯（直链）：
1）组分：C1～C6
2）斜率A2：14.3
3）截距B2：－22.9
（18）乙酸酯（支链）：
1）组分：C3～C6
2）斜率A2：14
3）截距B2：－20.3
（19）甲基丙烯酸酯：
1）组分：C1～C5
2）斜率A2：11.5
3）截距B2：－6.32
（20）直链取代酚类：
1）组分：C6～C10
2）斜率A2：8.1
3）截距B2：8.1
（21）烷基磺酸甲酯：
1）组分：C1～C6
2）斜率A2：14
3）截距B2：0
（22）脂肪酸类：
1）组分：C1～C8
2）斜率A2：13.6
3）截距B2：－12
2、有效碳数规律法：
对于不同类型有机化合物的相对质量校正因子值，可以利用有效碳数规律进行计算。
有机化台物分子的总有效碳数等于构成该化合物各个基团的的有效碳数之和。
fm′=（∑ns/∑ni）×（Mi/Ms）
式中：ni为组分i的有效碳数。
ns为标准物质的有效碳数。
Mi为组分i的相对分子质量。
Ms为标准物质的相对分子质量。
不同类型有机化合物和基团的有效碳数：
（1）烷烃：
1）原子：C
2）有效碳数：1
（2）芳烃：
1）原子：C
2）有效碳数：1
（3）烯烃：
1）原子：C
2）有效碳数：0.95
（4）炔烃：
1）原子：C
2）有效碳数：1.3
（5）羰基：
1）原子：C
2）有效碳数：0
（6）羧基：
1）原子：C
2）有效碳数：0.32
（7）腈基：
1）原子：C
2）有效碳数：0.3
（8）醚类：
1）原子：C
2）有效碳数：－1
（9）伯醇：
1）原子：O
2）有效碳数：－0.6
（10）仲醇：
1）原子：O
2）有效碳数：－0.75
（11）叔醇：
1）原子：O
2）有效碳数：－0.25
（12）酯类：
1）原子：O
2）有效碳数：－0.25
（13）烷基上：
1）原子：Cl
2）有效碳数：－0.12
（14）烯烃上：
1）原子：Cl
2）有效碳数：0.05
（15）胺类：
1）原子：N
2）有效碳数：与对应醇中氧相似
第三节 色谱仪定量分析方法
色谱仪定量分析方法有归一化法、内标法、内标标准曲线法和外标法。
一、归一化法：
归一化法是将样品中所有组分的含量之和定为100%，计算其中某一组分百分含量的定量方法。
1、计算方法：
Ci% =（mi/m）×100% = fi′Ai/（∑fi′Ai）×100%
式中：Ci%为被测组分i的百分含量。
fi′为被测组分i的相对质量校正因子。
Ai为被测组分i的峰面积。
m为被测样品的质量。
mi为被测组分i的质量。
2、直接峰面积归一化法：
若样品中各组分的相对校正因子很接近（如同分异构体或同系物），可不用相对质量校正因子，直接用峰面积归一化法进行定量。即：
Ci% =（mi/m）×100% = Ai/（∑Ai）×100%
采用色谱工作站处理数据时，往往采用直接峰面积归一化法定量各组分的面积百分比，结果的相对误差在10%左右。若是校正因子比较接近的组分（如同系物），直接峰面积归一化法定量结果的误差很小，在误差允许范围之内。
3、特点：
（1）样品中所有组分必须都能出峰，必须知道每个组分的相对校正因子。
（2）简便准确。进样量的多少与定量结果无关，操作条件（如流速和柱温）的变化对定量结果的影响较小。
（3）某些不需要定量的组分也必须知道其相对校正因子，也必须测出其峰面积。
4、应用：
常用于常量分析，尤其适合进样量很少而其体积不易准确测量的液体样品。
二、内标法：
内标法是利用被测组分与内标物的的相对校正因子的比值不变进行定量的方法。
1、计算方法：
mi/ms =（fi′Ai）/（fs′As）
Ci% =（mi/m）×100% =（fi′Aims）/（fs′Asm）×100% =（fi′/fs′）×（Ai/As）×（ms/m）×100%
式中：Ci%为被测组分i的百分含量。
Ai为被测组分i的峰面积。
As为内标物的峰面积。
fi′为被测组分i的相对质量校正因子。
fs′为内标物的相对质量校正因子。
m为被测样品的质量。
mi为被测组分i的质量。
ms为内标物的质量。
2、内标物应满足的要求：
（1）内标物必须是被测样品中不存在的。
（2）内标物不与被测样品发生化学反应，在所给定的色谱条件下具有一定的化学稳定性。
（3）具有较高的纯度。
（4）与被测样品有相近的浓度和类似的保留行为。
（5）在接近被测样品的保留时间内洗脱下来。
（6）内标物峰应与被测组分峰分开，并尽量接近被测组分峰。
（7）内标物的校正因子应为已知的或者可测定。
3、具体做法：
准确称取样品，加入一定量某种纯物质作为内标物，然后进行色谱分析。根据样品和内标物的质量以及被测组分和内标物的峰面积的比值，求出被测组分的含量。
4、特点：
（1）由于标准物质和被测样品处在同一基体中，可以消除基体带来的干扰，而且当仪器参数和洗脱条件发生非人为的变化时，标准物质和被测样品都会受到同样影响，这样消除了系统误差，定量结果较准确。
（2）在样品中增加了内标物，常会对分离造成一定困难。
（3）每次分析必须准确称量被测样品和内标物，不适合大批量样品的快速分析。
5、应用：
当样品各组分不能全部流出、有些组分在检测器上无信号或只需对样品中某几个出峰组分进行定量时，可采用内标法。
适合微量分析。
三、内标标准曲线法：
色谱分析中用内标法计算被测组分含量的公式为：
Ci% =（fi′/fs′）×（Ai/As）×（ms/m）×100%
式中：Ci%为被测组分i的百分含量。
Ai为被测组分i的峰面积。
As为内标物的峰面积。
fi′为被测组分i的相对质量校正因子。
fs′为内标物的相对质量校正因子。
m为被测样品的质量。
ms为内标物的质量。
若固定被测样品的质量，加入内标物的质量也恒定，则（fi′/fs′）×（ms/m）×100%为常数，上式可简化为：
Ci% =（Ai/As）×常数×100%
若以Ci%对Ai/As作图，可得到一条通过原点的直线，此直线称为内标标准曲线。
1、具体做法：
（1）将被测组分的纯物质配成不同浓度的标准溶液。
（2）取固定质量的标准溶液和内标物，混合后进样分析，测出Ai和As。
（3）用Ai/As对标准溶液浓度作图，可得到一组通过原点的直线（内标标准曲线）。
（4）称取与绘制标准曲线时相同质量的样品和内标物，测出其峰面积比，由标准曲线即可查出被测组分的含量。
2、特点：
不用计算相对校正因子，对液体样品也可量取体积，简便快速。
四、外标法：
外标法是在相同分析条件下，通过比较被测样品与被测样品的纯物质的色谱峰面积或峰高进行定量的方法，
1、具体做法：
将被测样品的纯物质配制成不同浓度的标准样品溶液，在与被测样品相同的色谱条件下，等体积准确进样，测量各种浓度下对应的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线。标准曲线应是通过原点的直线。若标准曲线不通过原点，说明存在系统误差。
分析样品时，用与绘制标准曲线完全相同的色谱条件，准确进样与标准样品溶液相同体积的样品，测量峰面积或峰高，从标准曲线上查出被测组分的百分含量。
2、单点校正法：
当被测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，可以不用绘制标准曲线，而用单点校正法，即直接比较法进行定量。
具体做法是先配制一个与被测组分含量相近的已知浓度的标准样品溶液，在相同的色谱条件下，分别将被测样品溶液和标准样品溶液等体积进样，作出色谱图，测量被测组分和标准样品的峰面积或峰高，然后由下式计算出样品中被测组分的含量：
Ci% =（Cs%/As）×Ai×100%或Ci% =（Cs%/hs）×hi×100%
式中：Ci%为被测组分i的百分含量。
Cs%为标准样品的百分含量。
Ai为被测组分i的峰面积。
As为标准样品的峰面积。
hi为被测组分i的峰高。
hs为标准样品的峰高。
3、特点：
（1）不使用校正因子，准确性较高。
（2）操作条件变化对结果准确性影响较大。
（3）对进样量的准确性控制要求较高。
4、应用：
适用于进样量重现性较好和操作条件较稳定的情况。
适合大批量样品的快速分析。
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