高效离子交换色谱仪的操作使用包括离子交换剂的选择与处理、色谱柱的选择、装柱、平衡缓冲液的选择、上样、洗脱、检测、分离后样品的浓缩与脱盐、离子交换剂的再生与转型等。

一、离子交换剂的选择：

1、确定是用阳离子交换剂，还是阴离子交换剂。

2、选择离子交换剂的基质。

二、离子交换剂的处理：

处理流程：充分溶胀，除去杂质和细小颗粒，用酸碱分别浸泡水洗至中性，排除气泡。

阳离子交换树脂一般为Na型，阴离子交换树脂一般为Cl型。处理时，一般情况下，阳离子交换树脂最后用NaOH处理，阴离子交换树脂最后用HCl处理，使用的酸碱浓度一般小于2M，浸泡时间一般为30min。

三、色谱柱的选择：

离子交换色谱柱通常粗短，直径和长度比一般为1：10～1：50。

四、装柱：

1、色谱柱安装要垂直。

2、装柱时要均匀平整，不能有气泡。

五、平衡缓冲液的选择：

平衡缓冲液是指装柱后和上样后用于平衡离子交换色谱柱的缓冲液。

平衡缓冲液的离子强度和pH值要保证各个待分离物质的稳定，要使各个待分离物质与离子交换剂有适当的结合，并尽量使待分离物质和杂质与离子交换剂的结合有较大的差别。

六、上样：

上样方式有正上柱和反上柱。

上样时注意样品液的离子强度和pH值，上样量应小于工作交换量。

七、洗脱：

1、洗脱液的选择：

（1）保证所有组分在洗脱液梯度范围内都是稳定的。

（2）要使结合在离子交换剂上的所有组分在洗脱液梯度范围内都能够被洗脱。

（3）梯度范围尽量小一些，以提高分辨率。

2、洗脱方式：

离子交换色谱一般采用梯度洗脱，通常有改变离子强度和改变pH值两种洗脱方式。

（1）改变离子强度的洗脱：

在洗脱过程中逐步增大离子强度，从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来。

（2）改变pH值的洗脱：

阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱，阴离子交换剂一般是pH值从高到低洗脱。

由于pH值可能对蛋白的稳定性有较大的影响，一般采用改变离子强度进行洗脱。

3、洗脱速度：

洗脱液的流速会影响离子交换分离效果，洗脱速度通常要保持恒定。

一般来说，洗脱速度慢比快的分辨率要好，但过慢会造成分离时间长、样品扩散、谱峰变宽和分辨率降低等。

如果洗脱峰相对集中于某个区域造成重叠，应适当缩小梯度范围或降低洗脱速度来提高分辨率。

如果分辨率较好，但洗脱峰过宽，可适当提高洗脱速度。

八、检测：

检测器检测。

九、分离后样品的浓缩与脱盐：

经离子交换分离后得到的样品往往盐浓度较高，体积较大，样品浓度较低，所以分离后样品一般要进行浓缩与脱盐处理。

十、离子交换剂的再生与转型：

1、离子交换剂的再生：指对使用过的离子交换剂进行处理，使其恢复原来性状的过程。

2、离子交换剂的转型：指离子交换剂由一种平衡离子转为另一种平衡离子的过程。

   

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