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高效毛细管电泳仪检测器归纳 
(发布日期:2016-3-22 23:42:25) 来源:
 
   
高效毛细管电泳仪检测器有紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器、质谱检测器和拉曼光谱检测器等。其中前两种使用最广。
一、紫外检测器:
1、原理:
入射紫外光通过样品时,被吸收的多少符合朗伯-比耳定律。
检测点在靠近末端的毛细管上,检测点的毛细管的外涂层要烧掉。
2、检测方法:
(1)固定波长:
光源为低紫外氘灯,用滤光片获得固定波长的光。
(2)可变波长:
光源为氘灯或钨灯,用单色器(棱镜或光栅)获得连续可调波长的光。
(3)快速扫描:
1)利用线性二极管阵列快速捕获紫外光,
2)利用硅光电倍增管作快速扫描。
二、荧光检测器:
1、原理:
多原子分子吸收光子时,电子从基态跃迁到高能态,然后分子通过无辐射过程弛豫到最低激发态,并在回到基态时发射出光子(荧光)。
2、光源:
激发用的辐射光为紫外光或激光。
激光单色性好,容易校准和减小光散射,可大大提高检测灵敏度。常用波长325nm的氦-镉激光光源(He-Cd)。
3、检测方法:
检测在毛细管上进行,毛细管的外涂层要烧掉。
4、应用:
在DNA序列测定的HPCE中广泛使用。但对不能发射天然荧光的化合物,须预先加荧光剂。
三、电化学检测器:
电化学检测器可避免光学类检测器遇到的光程太短的问题,是HPCE中最灵敏的检测器之一。
检测毛细管中的电泳流出物,根据检测原理可分为伏安检测器和电导检测器等。
四、质谱检测器:
1、原理:
将待测物分子转为带电粒子,然后用恒定磁场使带电粒子按质量大小顺序分离,形成质量谱图。
2、特点:
(1)对单一组分有很强的鉴别能力。
(2)对复杂大分子混合物的分离能力极强。
3、类型:
类型很多,其中电喷射离子质谱对蛋白质的鉴别特别有用。
五、拉曼光谱检测器:
1、原理:
单色光照射被分析物,通过拉曼技术控制散射光,使其在返回原来位置时作全方位的重新发射。入射光和散射光之间的频差一般落在中红外区。
2、光源:
光源为40mW的He-Cd激光发生器,在422nm处发射激光,在471.2nm处检测散射光。
六、间接检测:
间接检测有间接紫外检测、间接荧光检测和间接电导检测等。
间接紫外检测是在缓冲液中加少量在紫外区有吸收的化合物(间接试剂),使之产生很高的本底。当无紫外吸收的离子通过窗口时,从而产生一个负峰。间接紫外检测灵敏度比直接检测低1~2个数量级。
   
来源:http://www.fudizao.com
   
 
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