高效液相色谱仪在进行多成分的复杂样品分离时，经常会碰到前面的一些成分分离不完全，后面的一些成分分离度太大，且出峰很晚和峰形较差。为了使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并相互分离，往往要用到梯度洗脱技术。

一、工作原理：

流动相由两种（或多种）不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例而改变流动相的极性、PH值和离子强度，使每个流出的组分都有合适的容量因子，并使样品的所有组分在最短时间内实现最佳分离。

二、类型：

1、低压梯度：

只需一台高压输液泵，比例阀在泵之前，溶液在常压（低压）下混合。

简单，经济，只需一个泵，所用溶剂的元数没有限制。

2、高压梯度：

采用两台高压输液泵，分别按设定的比例各输送一种溶液至混合器，混合器在泵之后，两种溶液在高压状态下混合。

流量精度高，溶剂的可压缩性和热力学体积的变化可能影响输入色谱柱中溶剂的组成。

三、实现方式：

对于复杂样品，线性梯度是最好的。

正相色谱中，常用二氯甲烷加入正己烷来实现。

反相色谱中，乙腈、甲醇加入水中是最常用的。

四、特点：

1、优点：

分离复杂混合物，使所有组分都处在最佳的k值范围内。

2、缺点：

检测器的使用受到限制，分析结果的重复性取决于流速的稳定性，色谱柱需进行再生处理。

   

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